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楼主  发表于: 2015-05-10 08:48

 PNAS:天然免疫受体阻断剂研发进展

PNAS:天然免疫受体阻断剂研发进展$ v1 w! r: Y' c& O/ S: o0 N
作者:   来源:创药网   发布者:张荐辕   日期:2015-05-08   $ D9 F' X% D( A* B3 a
TLR是一类I型的跨膜蛋白,可以特异性识别微生物特异性的抗原物质(PAMPs)。TLR-2与TLR-6或TLR-1聚合形成异源二聚体可以分别识别二酰脂多肽或三酰脂多肽。当配体物质与聚合后的TLR1/2以及TLR2/6结合后,会招募下游的接合蛋白MyD88。TLR-2信号的缺陷会导致许多免疫疾病(如脓毒症,动脉粥样硬化,肿瘤扩散等)。目前有许多TLR的抑制剂被开发出来,但是都没有获得批准,因此,要想治疗这一类疾病,就必须对TLR2的信号传递机制做更深入的研究。
TLR以及接合蛋白都含有一个TIR结构域(即Toll/IL-1 resistant)该结构域介导了TLR的相互聚合以及下游的信号传递。基于最近的结构学研究:TLR2的TIR结构域中有一个由beta-链与alpha-螺旋组成的"口袋"状结构(BB loop),这一段多肽由相对保守的脯氨酸与甘氨酸组成。来自马里兰大学免疫系的Stefanie N. Vogel等人希望以这一段区域为靶点设计TLR-2特异性的阻断剂,他们的研究结果发表在最近一期的《PNAS》杂志上。" `3 q, }& D5 ^6 i
首先,作者利用计算机辅助的方法,针对BB loop区删选了所有可能插入的小分子化合物以及已经上市的药物。他们筛选到了1000多种有可能会该区域发生互作的潜在分子,其中有149种小分子化合物以及20种上市药物具有高效的TLR-2信号阻断活性。
    6 {0 w) c% A# @( a4 U# d0 N
之后,作者将筛选到的化合物进行体外试验。这些药物分别与转染了TLR-2的HEK293细胞进行孵育,随后细胞经过TLR2配体的并检测下游的IL-8的表达。结果显示,第C29号化合物能够有效地抑制配体引起的HEK293细胞IL-18的分泌。随后,作者在人源的单核细胞系THP-1中验证了上述结果。接下来,作者检测了该药物对小鼠的TLR-2信号的阻断效应。结果显示,C29能够有效地抑制TLR-1/2的信号传递,但不能抑制TLR2/6的信号传递。
    
另外,作者还发现该药物还能够抑制微生物本身引起的TLR2的信号传递。& |1 i+ \: X) l* O- t3 H
    : L: K6 v1 P, i- t8 {+ R. s( G0 M
随后,作者通过生化实验发现C29能够抑制TLR-2激活后与下游MyD88的相互作用。并且C29能够抑制MAPK p38以及ERK的磷酸化。, U! {2 O1 g8 m4 s- q3 E# t
    
那么C29是否是特异性针对BB-loop区的多肽序列呢?作者设计了一系列BB-loop突变试验,不幸的是,这些突变本身就会使得TLR-1/2的信号失活,因此无法通过这一手段证明C29的特异性。不过至少这一实验证明了BB LOOP区结构对于TLR-1/2的信号传递是至关重要的。3 O" B% d  \* ~' B* z, W7 P2 ]* ^' h
    
接下来作者证明了C29的一类衍生分子,C29L具有相似的效应。/ k4 u3 u6 L% z* w
    
最后,作者通过体内实验也证明了C29L能够抑制TLR-2生物活性的结论。
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1楼  发表于: 2015-05-10 16:30
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