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楼主  发表于: 2021-08-26 08:33天前

 河豚毒素对不同类型突触分泌的影响

河豚毒素(TTX)作为豚毒鱼类体内含有的一种生物碱,是毒性很强的一种非蛋白生物毒素,是一种典型的选择性极高的快速可逆的钠离通道阻断剂,可阻止钠离子进入细胞从而影响细胞膜动作电位产生。

实验中TTX常被使用于阻断钠离子通道,为了研究TTX在抑制阻断神经递质的诱发释放的两种不同电流中是否存在差异,以及探求TTX的最低完全阻断的工作浓度,在汉斯出版社《生物物理学》期刊中,有学者分别采用不同浓度的TTX作用于原代小鼠大脑皮层神经元细胞,记录不同浓度TTX存在下的eIPSC与eEPSC。

取新生24小时内的野生型小鼠,将新生鼠消毒后放入超净工作台中,断头处死,分离出大脑皮层,放入提前预冷的HBS缓冲液中。将HBS缓冲液倒掉,加入1mL0.25%的胰酶,放入37℃培养箱中消化,倒计时12~13分钟,消化完成后将胰酶吸干净,加入3mLplating溶液,清洗三遍防止胰酶残留,加入2mLplating溶液轻轻吹打8~12次,将细胞吹散。接下来用70μm的细胞筛滤去组织块,加入一定体积的plating溶液定容(按一只老鼠种植12个孔的比例定容),上下颠倒混匀后每个孔加入1mL细胞悬浮液。最后将细胞悬液滴于玻片上进行培养。培养的第一天换上无Ara-C培养基,在培养的第四天和第九天换上含4μM的Ara-C培养基,培养13~14天至细胞成熟后进行电生理实验记录。

本实验通过使用大脑皮层神经元细胞在不同浓度TTX存在的条件下进行电生理实验来验证,可以从最后的实验结果中发现,随着TTX浓度的增加,它对诱发的突触后电流的抑制作用逐步增强,呈现出一种浓度依赖性关系。将eIPSC组与eEPSC组相比较,eEPSC组的IC50明显大于eIPSC组,这意味着诱发的突触后兴奋性神经递质的释放会对TTX的浓度变化更为敏感。综上所述,河豚毒素对不同类型的突触后电流影响不同,且诱发的兴奋性突触后电流对河豚毒素浓度变化更敏感。
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