| 焦糖朵儿 |
2013-03-09 15:33 |
MP人淋巴细胞分离液使用说明书
用途：
从去纤维蛋白或肝素化的全血中分离淋巴细胞。
方法概述：
早期分离白细胞的方法，会在血液里加入一种只轻微影 响白细胞，但能引起红细胞聚集的组分。离心之后，红 细胞会因为密度增加而沉淀下来，这样白细胞就能从上 层液体里得到回收。
Boyum引入了一种基于Ficoll-sodium metrizoate溶液的更 简便、更快速的离心分离法。将稀释后的血液分层状叠 放在Ficoll-sodium metrizoate溶液上，经由低速的短时间 离心，红细胞和粒细胞会沉淀到管底，而白细胞和血小 板则可以从两相间质中收集获得。
产品特点：
MP Biomedicals对Boyum的提取配方进行了改良，在淋巴 细胞分离液L™中成功地运用sodium diatrizoate替代了 sodium metrizoate。
L™(sterile-filtered)溶液密度为1.077-1.080g/mL(20°C)。仅需一步离心操作便能高效地回收淋巴细胞。
程序原理：
用生理盐水或平衡盐溶液稀释去纤维蛋白质或者肝素化的全血，比例为1:1.将其置于分离液上层。低速离心30分钟，由于迁移速率的不同溶液内形成多个细胞层。底部的细胞团主要是由红细胞、粒细胞组成的。由于密度的原因，淋巴细胞和其生化试剂分布在血浆层和L层之间，将该层吸出，并通过进一步的漂洗，移除血小板，L和血浆便可回收得到淋巴细胞。
使用说明：
1.轻轻颠倒混匀L溶液
2.无菌操作，转移3ml L到15ml的离心管中
3.将2ml去纤维蛋白或肝素化的全血同2ml生理盐水混合
4.将稀释后的血液小心的转移到15ml管内的L溶液上 (3ml、室温)，使两者界面分明。
5.室温下400 x g离心15~30分钟
6.吸取顶部的血浆层直至液面下降至距离淋巴细胞层约2~3mm处。
7. 吸取淋巴细胞层以及其下的约一半体积的L层，将他们转移至离心管中。将等体积的平衡盐缓冲液加至离心管中的淋巴细胞层中，室温下离心(160~260xg)10分钟，沉淀细胞。
8. 用平衡盐缓冲液再次洗涤细胞，根据具体的实验需求，用相应培养基重悬细胞。 |
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