| wangkekaoyan |
2011-06-14 22:04 |
我在设计一个荧光分光光度分析的实验：一个标本内有两种物质，一种是自带红色荧光的物质：激发波长620nm，发射波长680nm。另一种是FITC标记的物质，带绿色荧光：激发波长485nm，发射波长520nm，请问在同一个标本里，分别检测这两种物质的含量，可不可以？会不会有相互干扰，影响大吗？
附实验方法：快速切取目的组织，样品称重后，置入盛有50%三氯乙酸（Trichloroacetic Acid,TCA）溶液1.5ml的匀浆器中匀浆，匀浆液体用50％TCA稀释至10ml，倒入15ml离心管中，调节转速10000rpm，温度4℃，离心20分钟。取上清液1.0ml，加入1.5ml混合液（50%TCA和无水乙醇按1：3的比例配制而成），充分混匀。应用荧光分光光度（物质A：激发波长620nm，发射波长680nm，FITC标记的物质B：激发波长485nm，发射波长520nm）测定荧光值。校零标准品为50%TCA与无水乙醇按1：3比例配制，用校零标准品配制不同浓度的物质A溶液（0.1-5μg /ml）和物质B溶液（0.1-4μg /ml），测定其荧光值，绘制药物浓度与荧光值之间的标准曲线。依据所测得的荧光值求得组织内物质A和物质B含量。 |
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